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c是阴性还是阳性(艾滋病抗体检测技术)

c是阴性还是阳性,c代表的是艾滋病病毒中的一种亚型, coron*irus的英文缩写。艾滋病病毒是一种 DNA病毒,能使人体细胞内的基因发生突变,导致人体出现一系列严重*。艾滋病病毒对人体细胞具有很强的破坏性,能感染所有细胞,导致人体免疫功能下降或完全丧失。如果是感染了 HIV病毒,那么患者可能会出现发热、全身不适、肌肉疼痛等*;如果不及时*,那么可能会出现心脏、肝脏、肾脏等器官严重衰竭,最终因全身多器官功能衰竭而*亡。艾滋病的检测方法有哪些?
艾滋病病毒检验分为三种:一是血液检验,包括 HIV抗体检测和血液细胞检测。
二是尿液检验,包括尿中蛋白定性、尿中抗体滴度、 HIV DNA定量、尿中细菌培养。
三是唾液检测,即唾液样本的核酸检测。
血液细胞检测中最常用的是酶联免疫法(ELISA),但这种方法敏感性不高、*作过程繁琐、耗时长,所以现在一般采用的是核酸扩增检测法(PCR)。
试剂盒是实验室用来分离和纯化核酸的工具。核酸可分为基因和非基因两种类型。


1、酶联免疫吸附法

酶联免疫吸附试验(ELISA)是近年来应用最为广泛的一种检测艾滋病病毒感染的方法。该方法是根据抗原或抗体与酶结合的特异性来进行检测的。酶联免疫吸附试验(ELISA)原理简单,*作方便,目前已经成为诊断和*艾滋病及其它感染疾病最常用的手段之一,且应用十分广泛。
1) ELISA检测 HIV抗体灵敏度较高,当 HIV抗体水平较低时,如<30 ng/ml时即可检出;
2) ELISA可检测标本中的 HIV病毒 DNA水平;
3) ELISA检测范围较广,可以用于各种不同临床标本中的 HIV抗体水平检测;
4) ELISA可用于检测细胞免疫功能受损、免疫抑制患者、艾滋病病人和长期接受抗逆转录病毒*患者的血清和血浆中的 HIV抗体水平;
5) ELISA具有较高的特异性,且可避免与其他病毒感染的交叉反应;
6) ELISA通常使用固相载体,可在实验室内进行*作。对于无法获得或不愿制备固相载体的标本,也可使用凝胶电泳等方法进行定性、定量分析。

2、聚合酶链式反应

聚合酶链式反应(PCR)是目前研究较多的一种用于艾滋病检测的方法,其原理是利用 DNA聚合酶对特定 DN*段的特异性扩增,该方法具有灵敏、特异、*作简单等优点,目前已被广泛应用于各种感染性疾病的检测。
PCR原理:首先制备一些不含 PCR特异性模板序列的核酸序列,将此序列加入到反应体系中,使模板退火形成发夹结构,然后加入引物和 DNA模板,继续聚合酶链式反应。待扩增产物由变性、退火、延伸3个阶段组成。该方法*作简单、快速,通常用于基因表达和突变检测。
检测方法: PCR法是利用已知 DNA分子设计引物和 DNA模板,在特定温度下扩增目的基因片段的方法。
PCR试剂盒:用于 HIV感染的检测,需要检测 RNA和 DNA两种物质,一般是使用核酸扩增检测试剂盒(聚合酶链式反应试剂盒)。它主要分为普通 PCR法和荧光定量 PCR法。
普通 PCR法是将标本中的 DNA提取出来后进行加热处理,然后利用专用的设备进行扩增。
一般情况下使用普通 PCR法检测结果为阴性。荧光定量 PCR是在扩增过程中加入荧光物质(如荧光素、荧光染料、引物和 DNA模板等)使结果显示为阳性。荧光定量 PCR法灵敏度高、特异性强。

3、基因芯片法

基因芯片技术是二十世纪90年代后期发展起来的一项新兴技术,它是在核酸分子杂交技术基础上发展起来的,其基本原理是将基因探针标记在生物芯片上,利用杂交、分析仪器将检测信号放大后再进行分析。基因芯片技术具有高通量、高灵敏等特点,在临床诊断、科研分析、基因芯片医学等领域具有广泛应用前景。
基因芯片(Gene chip)是一种将特异 DNA探针标记于生物芯片上的方法,目前已广泛用于各种检测中,如肿瘤标志物的测定和食品安全监测。基因芯片可以在整个基因组水平上进行高通量检测,可用于疾病的早期诊断,也可用于其他生物大分子的检测。近年来基因芯片技术得到了飞速发展。在临床检验中主要用于疾病诊断,对 HIV感染者进行快速、准确的诊断和病毒载量检测。
1.阳性:指检测结果为阳性(如 HIV抗体或 HIV病毒核酸检测),表示患者已感染了 HIV病毒并处于发病期。
3.阴性但阳性:指检测结果为弱阳性(如CD4+T细胞计数<200个/μl)或弱阴性(如CD4+T细胞计数<200个/μl)。
4.阴性:指检测结果为阳性,但与感染了艾滋病病毒的患者相比无明显差别,其临床意义尚不能确定。
5.阴性且阳性:指检测结果为弱阳性或阴性,也说明没有感染艾滋病病毒。
7.艾滋病相关抗原(如 HVTN):指感染艾滋病病毒后从血液中分离出来的一种蛋白质,其可以作为抗原引起机体免疫反应而产生抗艾滋病病毒抗体和T细胞反应。

4、 PCR技术检测

PCR技术检测艾滋病病毒的原理是聚合酶链式反应,它是目前在检测 HIV抗体方面应用最为广泛的技术。PCR技术是一种能将特定核酸序列扩增成线性片段的技术。其基本原理是利用逆转录酶将病毒基因组 DNA聚合成单链片段,然后利用 PCR的特异反应条件进行扩增,产生大量的 PCR产物,最后利用荧光检测仪对产物进行定性和定量检测。
HIV抗体检测应该怎么做?
1、窗口期检查:窗口期为感染后六周左右,一般为2~6周。窗口期内检测结果为阴性,但不能排除感染,可以结合其他检测方法共同诊断。
2、初筛试验:如选择基层医疗机构开展初筛检测,可于1~2周后再做一次 HIV抗体初筛试验,如果仍为阴性,可排除诊断。如选择自愿咨询检测,应在暴露后6个月进行。
3、确证试验:如选择疾控或医院就诊初筛检测阳性者或接受门诊抗病毒*者,应在*3个月后、12个月、24个月各复查一次。如果在*后3个月内未检测到 HIV抗体,则可判定为阴性。

5、 ELISA检测艾滋病抗体

ELISA检测艾滋病抗体是一种非侵入性的快速检测方法,其敏感性较高,使用范围广泛,目前已经成为我国 HIV抗体检测的主要手段。其*作步骤如下:
(1)样本的预处理:将血清与抗 HIV抗体混合,采用磷酸盐缓冲液(PBS)预处理。使用 PBS的目的是为了降低血清中的其他物质,例如脂肪、无机盐和纤维蛋白等。经预处理后的血清用来做 ELISA试验,这样可以增加检测结果的准确性和可靠性。
(2)包被抗体及抗原:将包被抗体及抗原加入到适当的反应孔中,置于37℃温育2h。
(3)加样:向包被抗体及抗原加入反应孔中,待其充分反应后加入样本。
(4)显色:加样后2~3 min开始显色。

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